PCR實(shí)驗(yàn)室，也叫臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室，是專(zhuān)門(mén)用于檢測(cè)艾滋病、乙型肝炎、禽類(lèi)和其他感染性疾病的實(shí)驗(yàn)室。整理了 PCR實(shí)驗(yàn)室的施工規(guī)范，并附上 PCR實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備清單，供大家參考~
用 PCR方法擴(kuò)增包含在病毒體內(nèi)的基因，可以檢測(cè)感染者體內(nèi)是否含有某種病毒。該法具有靈敏、特異、快速、對(duì)樣品要求低等優(yōu)點(diǎn)，因而受到廣泛的重視。PCR實(shí)驗(yàn)已廣泛應(yīng)用于臨床診斷，各防疫檢測(cè)部門(mén)對(duì)禽類(lèi)疾病的診斷。
但這類(lèi)實(shí)驗(yàn)需要有安全的環(huán)境、合理配置的實(shí)驗(yàn)室、規(guī)范的操作。近幾年， PCR實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)越來(lái)越規(guī)范和重視。
本論文從基因擴(kuò)增檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的平面布置、空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計(jì)、氣流控制、污染防治等幾個(gè)方面闡述了實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)中的主要特點(diǎn)，并附上了 PCR實(shí)驗(yàn)室常用設(shè)備清單。
一、 PCR實(shí)驗(yàn)室平面布置
臨床基因擴(kuò)增檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室原則上分為四個(gè)獨(dú)立的工作區(qū)：試劑準(zhǔn)備區(qū)、制樣區(qū)、擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)。為了避免交叉污染，進(jìn)入各個(gè)工作區(qū)域必須嚴(yán)格沿一個(gè)單一的方向進(jìn)行，即只能從試劑貯存與準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備→擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增反應(yīng)區(qū)→產(chǎn)物分析區(qū)。
在實(shí)驗(yàn)區(qū)域間，應(yīng)采用傳送窗將試劑和樣品傳送。
二 PCR實(shí)驗(yàn)室的空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)與壓力控制
PCR實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有嚴(yán)格的凈化要求，但為了避免各試驗(yàn)區(qū)間可能出現(xiàn)交叉污染，建議采用全送全排氣流組織。與此同時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格控制送、排風(fēng)量，保證各試驗(yàn)區(qū)的壓力要求。
1、 PCR實(shí)驗(yàn)室試劑儲(chǔ)藏及準(zhǔn)備區(qū)
試驗(yàn)區(qū)主要進(jìn)行的操作是：貯存試劑的準(zhǔn)備、試劑的分裝、主反應(yīng)混合液的制備。
對(duì)于氣流壓力的控制，本區(qū)并無(wú)嚴(yán)格要求。
2、 PCR實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)本制備區(qū)域
在這一地區(qū)主要進(jìn)行的操作包括臨床標(biāo)本的保存、核酸(RNA、 DNA)的提取、儲(chǔ)存以及添加到擴(kuò)增反應(yīng)管中 cDNA的合成。
3、 PCR實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增反應(yīng)混合物的配制及擴(kuò)展區(qū)
本區(qū)操作以 DNA或 cDNA擴(kuò)增為主。
4、 PCR實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)
在這一地區(qū)主要進(jìn)行的是擴(kuò)增片段的測(cè)定。如果用全自動(dòng)封閉分析儀器檢測(cè)，這個(gè)區(qū)域可以不設(shè)。
三、 PCR實(shí)驗(yàn)室污染防治措施
PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的核心是如何防止污染。實(shí)踐中，污染主要表現(xiàn)為：擴(kuò)增產(chǎn)物的污染、天然基因組 DNA的污染、試劑污染和標(biāo)本間的污染。因?yàn)楫?dāng)污染發(fā)生時(shí)，實(shí)驗(yàn)必須停止，直到找到污染源為止，并且結(jié)果必須無(wú)效，需要重新進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。因此出現(xiàn)污染后再?lài)@實(shí)驗(yàn)室尋找污染源不僅費(fèi)時(shí)又麻煩，浪費(fèi)人力物力。所以要避免污染，首先應(yīng)該是預(yù)防，而非排除。
1.嚴(yán)格劃分工作區(qū)域
2.系統(tǒng)的合理設(shè)置
3.標(biāo)準(zhǔn)操作
4、嚴(yán)苛管理
5、實(shí)驗(yàn)室配套齊全